慢性乳腺炎患者分离克氏棒杆菌的耐药性及临床

慢性乳腺炎发病机制尚未完全明确，与细菌学的关系长期以来备受争议，但近年来不断出现慢性乳腺炎合并感染克氏棒杆菌的病例报道。据文献报道，克氏棒杆菌菌株几乎全部从慢性乳腺炎患者脓液中分离获得[1-2]。克氏棒杆菌为亲脂性棒杆菌，需在高脂环境中生存[3]；亲脂性是此菌的主要致病特征，经产妇女的乳腺组织进一步发育很可能是细菌易感的原因，富含脂肪的乳腺组织为其生长提供了最佳生存环境。在本院就诊的慢性乳腺炎患者中越来越多的患者合并感染克氏棒杆菌。本研究收集本院从慢性乳腺炎患者中分离的克氏棒杆菌19株，对其耐药性进行了分析，并探讨了其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1资料

1.1.1菌株来源 收集2018年9月至2020年3月本院从临床住院慢性乳腺炎患者中分离的克氏棒杆菌 19株，同一患者多次分离该菌株仅收集第1次菌株纳入研究。其中浆细胞性乳腺炎(PCM)患者12例(63.2%，PCM组)，肉芽肿性乳腺炎(GM)患者7例(36.8%，GM 组)。

1.1.2仪器与试剂 3D血培养瓶、E-实验抗菌药物(法国梅里埃公司)、哥伦比亚血平板、血MH平板(赛默飞)、吐温-80等；BacT/Alert 3D 血培养仪(法国梅里埃公司)、基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪(BD布鲁克)、聚合酶链反应仪、凝胶成像仪(美国 Bio-Rad 公司)等。

1.2方法

1.2.1临床资料收集 采用回顾性分析对PCM和GM中分离出的19株克氏棒杆菌感染患者进行临床资料的收集及分析，临床诊断以病理检查结果为准。临床资料包括患者年龄、性别、临床诊断、抗生素的使用、治疗方式、生育情况、淋巴结肿大、月经、乳头溢液、乳头内陷、喝酒、吸烟、愈后和复发等。

1.2.2细菌培养、鉴定与药敏试验 采集患者术中脓液培养接种于哥伦比亚血平板，同时，将脓液注入血培养瓶中培养；采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱及测序方法进行细菌鉴定，16sRNA扩增引物序列：16sRNA-F：TGCCAGCAGCCGCGCGGTAATAC，16sRNA-R：CGCTCGTTGCGGGACTTAACC，测序结果在GenBank上进行比对(http：/// )。药敏试验采用E-实验方法，严格遵照美国临床和实验室标准化协会推荐的琼脂稀释法，但细菌在含LHB的MH肉汤中生长不良，所以，采用E-实验法，按M45-A3[4]进行结果判定，质控菌株为肺炎链球菌 ATCC 和大肠埃希菌 ATCC 。

1.2.3克氏棒杆菌的改良培养 参照文献[4]的方法，克氏棒杆菌在含1%的吐温-80哥伦比亚血平板或含吐温的脑浸液肉汤中生长良好，配制含1%的吐温-80哥伦比亚血平板，观察细菌生长情况。

1.3统计学处理 应用SPSS20.0统计软件进行数据分析，计量资料以表示，采用独立样本t检验；计数资料以率或构成比表示，采用χ2检验或Fisher确切概率法。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.12组患者一般资料比较 PCM组患者年龄26～41岁，GM 组患者年龄23～32岁。2组患者年龄、抗生素的使用等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 2组患者一般资料比较组别PCM组(n=12)GM组(n=7)tP女[n(%)]12(100.0)7(100.0)--年龄(x±s,岁)31.已婚[n(%)]11(91.7)7(100.0)-1.000生育情况[n(%)]-0.057 已生育/妊娠中4(33.3)6(85.7) 未生育8(66.7)1(14.3)乳头内陷[n(%)]3(25.0)0--乳头溢液[n(%)]1(8.3)1(14.3)--淋巴结肿大[n(%)]7(58.3)3(42.9)-0.650经期规则[n(%)]12(100.0)7(100.0)--吸烟史[n(%)]00--喝酒史[n(%)]00--药物治疗[n(%)]-0.656 三联抗分枝杆菌药物6(50.0)2(28.6) 头孢菌素类3(25.0)4(57.1) 未使用抗生素1(8.3)1(14.3) 头孢唑肟联合奥硝唑1(8.3)0 喹诺酮类联合三联抗分 枝杆菌药物1(8.3)0手术方式[n(%)]-0.509 脓肿切开引流10(83.3)7(100.0) 象限切除1(8.3)0 脓肿切开引流联合象限 切除1(8.3)0预后良好[n(%)]12(100.0)7(100.0)--注：-表示无此项。

2.2克氏棒杆菌的鉴定

2.2.1细菌的菌落和镜下形态 细菌的菌落呈无色至灰色，无光泽，光滑，圆形，凸面，直径小于1 mm，不溶血。显微镜观察为细长革兰阳性杆菌，形状不规则，整体呈棒状，端部膨大，无芽孢，抗酸染色阴性。见图1。

A.克氏棒杆菌菌落形态；B.克氏棒杆菌显微镜下形态。图1 细菌的菌落和镜下形态

2.2.2质谱和测序鉴定 克氏棒杆菌鉴定值大于1.9，参照文献[1]准确鉴定为克氏棒杆菌；测序结果与质谱鉴定结果一致。

2.3药敏试验结果 19株克氏棒杆菌对万古霉素、利奈唑胺、庆大霉素、利福平敏感率均达到100.0%，对青霉素、环丙沙星、四环素、美罗培南敏感率分别为20.0%、30.0%、10.0%、60.0%，而对红霉素和克林霉素的耐药率均为100.0%。见表2。

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